人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究

• 作者: 平娟 庞晓斌 王保全 申智慧 赵娜 阴明星 陈传波
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人慢性粒细胞白血病 Bcr-abl基因 反义寡核苷酸 K562细胞 凋亡诱导
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 167-172
• 页数: 6页
• 分类号: R733.7
• 字数: 4159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2015.03.002

摘要

背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细胞白血病(chronic myelogenou leukemia，CML)bcr-abl融合基因mRNA的反义寡核苷酸，探讨bcr-abl反义寡核苷酸对K562细胞凋亡的诱导作用。方法：以bcr-abl融合基因mRNA翻译起始点融合前区19个寡核苷酸为作用靶点，设计反义寡核苷酸，以其反义寡核苷酸序列转染人慢性粒细胞K562细胞，采用Hoechst染色法观察不同浓度寡核苷酸对K562细胞株的凋亡情况，采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测自噬凋亡蛋白LC3-Ⅱ的表达情况，采用流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞周期变化，采用JEM-4000EX电镜术检测细胞凋亡形态变化，通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡情况。结果：Hoechst染色结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸能显著促进K562细胞的凋亡，且呈现一定的浓度依赖性。Western blot检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸各浓度组凋亡自噬蛋白LC3-Ⅱ表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸作用于K562细胞后，细胞周期阻滞于G0/G1期。各组G0/G1期、S期细胞数量与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。在JEM-4000EX电镜下可见明显的新月型凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳显示，10、30μmol/mL bcr-abl反义寡核苷酸组可以明显观察到以180~200 bp碱基对整倍数出现明暗间隔的DNA梯状条带。结论：Bcr-abl反义寡核苷酸可显著诱导K562细胞凋亡，为临床上基因治疗人CML提供一定的参考。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈传波	河南大学淮河临床学院	50	181	8.0	10.0
2	庞晓斌	河南大学药学院化学生物学实验室	39	129	7.0	9.0
3	赵娜	郑州大学附属肿瘤医院血液科	36	83	6.0	8.0
4	平娟	河南大学淮河临床学院	8	23	3.0	4.0
5	王保全	河南大学淮河临床学院	12	50	4.0	6.0
6	申智慧	郑州大学附属肿瘤医院血液科	3	6	1.0	2.0
7	阴明星	郑州大学附属肿瘤医院血液科	1	5	1.0	1.0