聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线技术在下呼吸道细菌鉴定中的应用

• 作者: 方霄 薛冰 赵焕英 郭伟 陈瑛
• 来源期刊: 微生物与感染
• 关键词: 聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线技术 微生物菌群 16S rDNA文库 慢性阻塞性肺病 哮喘
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 308-314
• 页数: 7页
• 字数: 4114字
• 语种: 中文

摘要

为探讨聚合酶链反应‐高分辨率熔解曲线（PCR‐HRM）技术在检测呼吸道菌群中的应用，本研究用支气管镜从慢性阻塞性肺病患者下呼吸道采集分泌液，提取细菌总DNA ，以16S通用引物27F／1492R扩增16S rDNA全长，PCR产物经电泳、纯化后连接到pGEMT‐Easy载体上，构建16S rDNA克隆文库。然后以16S rDNA V3区通用引物338F／518R扩增克隆文库，V3区PCR‐HRM分析在罗氏LightCycler 480实时荧光定量PCR系统中进行，采用HRM基因扫描软件分析数据。根据不同 HRM图型，挑选克隆株测序并鉴定菌株。结果显示，PCR‐HRM技术可灵敏区分下呼吸道不同细菌16S rDNA V3区，根据 HRM图谱可极大减少克隆菌株测序样本，提示PCR‐HRM技术可作为一种快速、高通量、敏感、经济的菌群多样性检测方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭伟	首都医科大学附属北京天坛医院急诊科	155	1076	14.0	28.0
2	赵焕英	首都医科大学医学实验与测试中心	55	178	7.0	11.0
3	陈瑛	首都医科大学附属友谊医院妇产科	28	110	7.0	8.0
4	薛冰	首都医科大学医学实验与测试中心	31	66	5.0	6.0