人表皮生长因子受体结构域蛋白的原核表达、纯化及活性检测

• 作者: 冀全博 李玲 李齐宏 梁迎春 梅国徽 洪甜 王涛 纪贝贝 郭靖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人表皮生长因子受体 胞外结构域 胞内激酶结构域 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 615-618
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2957字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.05.005

摘要

目的:构建人表皮生长因子受体(EGFR)胞外结构域(ED)和胞内激酶结构域(PKD)的原核表达载体,获得纯化的GST-EGFR-ED和GST-EGFR-PKD融合蛋白,并检测其活性.方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增EGFR的ED和PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白.结果:构建得到GST-EGFR-ED和GST-EGFR-PKD的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,经Western印迹检测,融合蛋白成功表达;纯化得到融合蛋白GST-EGFR-ED和GST-EGFR-PKD.结论:克隆了GST-EGFR-ED和GST-EGFR-PKD基因,并获得了活性良好的GST-EGFR-ED和GST-EGF-PKD融合蛋白,为研究EGFR在肿瘤中的作用奠定了实验基础.