罗非鱼无乳链球菌强毒株基因组表达文库的构建及鉴定

• 作者: 刘志刚 卢迈新 可小丽 方伟 曹建萌 朱华平 王淼 高风英
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 基因组表达文库
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 34-40
• 页数: 7页
• 分类号: S917.1
• 字数: 4872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.005

摘要

为了筛选罗非鱼(Oreochromis niloticus)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)在鱼体内特异诱导表达基因,该研究构建了罗非鱼无乳链球菌强毒株Hod-1的基因组表达文库.采用Sau3A Ⅰ对无乳链球菌菌株Hod-1基因组DNA进行不完全酶切,回收大小为0.5～2.0 kb的DNA片段,并与经BamH Ⅰ单酶切且去磷酸化的pET-28 a/b/c表达载体连接,转化表达宿主菌BL21(DE3).结果显示,所构建的无乳链球菌菌株Hod-1基因组表达文库含1.024×105个克隆,远大于覆盖无乳链球菌全基因组所需的最小库容量(45 579个).PCR检测结果显示重组子中外源片段的插入率为94％,插入片段大小为0.5～2.0 kb,且分布均匀,测序结果显示插入序列与GenBank中无乳链球菌基因组序列同源性高达99％以上.结果表明该研究成功构建了罗非鱼无乳链球菌的基因组表达文库,该文库可用于无乳链球菌在罗非鱼体内诱导表达基因的筛选.