油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建

• 作者: 武玉永 谭秀华 马立新
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 农学
• 关键词: 油菜 叶绿体 乙酰辅酶A羧化酶 单交换 表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 生理与分子生物学
• 页码范围: 609-617
• 页数: 9页
• 分类号: Q943.2|S565.4
• 语种: 中文

摘要

根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列.先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18GT 载体上,得到质粒pHGBM714.再以质粒pHBM714DNA为模板,用分别带有CpoI和AscI酶切位点的引物进行PCR扩增,PCR产物在dTTP的保护下经T4DNA聚合酶处理,与将质粒 pHBM720DNA纯化后经CpoI和AscI双酶切后得到的大片段连接,连接产物转化大肠杆菌Xl10Ggold,得到正确的重组子命名为pHBM726.此质粒pHGBM726,即为带有壮观霉素抗 性基因(aadA)筛选标记的质体定位的乙酰辅酶A 羧化酶基因油菜叶绿体单交换表达载体;在此载体中壮观霉素抗性基因(aadA)、乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因(ACC)和 绿色荧光蛋白基因(gfp)共6个基因串联在一起,共用一个启动子序列,一起来进行表达;通过酶切检测、PCR验证和测序验证,均表明该表达载体构建成功.最后此载体在大肠 杆菌中表达时,发现重组菌能够在含壮观霉素的培养基上生长,且在可见光下,能看到绿色荧光,表明壮观霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因均在大肠杆菌中成功表达;表达 产物通过Western印迹验证表明组成乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因在大肠杆菌中成功表达.以上结果表明,该表达载体中串联排列的这6个基因均在大肠杆菌中成功表达 .该研究结果可为质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转叶绿体的研究奠定基础,为油菜油脂代谢研究提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马立新	湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室	77	616	14.0	21.0
2	武玉永	滨州医学院医学遗传学教研室	31	101	6.0	8.0
3	谭秀华	滨州医学院医学遗传学教研室	17	54	4.0	6.0