利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达

• 作者: 孙乐 康璟妍 张海江 朱艳 梁前进 王钰
• 来源期刊: 科技导报
• 学科: 生物学
• 关键词: INMAP 肝癌细胞 多克隆抗体 包涵体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 分类号: Q753
• 语种: 中文
• DOI: 10.3981/j.issn.1000-7857.2015.01.002

摘要

为探究纺锤体蛋白INMAP的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用,制备INMAP多克隆抗体.利用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导His-INMAP融合蛋白进行原核表达,SDS-PAGE及免疫印迹检测蛋白表达.4.0 mol/L尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白,镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度.以所获抗原免疫4只Balb/c小鼠,收集心脏抗血清.以纯化前、后的原核表达产物作为抗原,检测INMAP多克隆抗体的特异性.通过免疫印迹分析INMAP在正常肝细胞系L-02及5个肝癌细胞系(PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721和BEL-7402)中的表达差异.结果显示,His-INMAP融合蛋白主要以包涵体形式存在,经4.0 mol/L尿素处理可获得可溶性目的蛋白,且纯化后的抗原纯度较高(94.1％).INMAP多克隆抗体能与INMAP抗原特异结合.INMAP在6种肝细胞中具有多态性,除PLC外,在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调.本研究制备的INMAP多克隆抗体特异性高,为INMAP基因功能的进一步研究奠定了基础.