运用穿梭质粒在小鼠沙眼衣原体中表达外源性基因

• 作者: 刘全忠 刘原君 孔杰 孙毅娜 韩珑 马璟玥
• 来源期刊: 中华临床感染病杂志
• 关键词: 衣原体,鼠 遗传载体 开放读码框 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 128-132
• 页数: 5页
• 字数: 2815字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-2397.2015.02.007

摘要

目的 在能够转化小鼠沙眼衣原体的穿梭质粒pGFP∷CM中加入新的开放读码框,为研究衣原体单个蛋白功能奠定基础.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增质粒pGFP∷CM和新的开放读码框(包括质粒蛋白pgp4的启动子、红色荧光蛋白mCherry基因和沙眼衣原体CT579的转录终止序列),将连接产物转化至大肠埃希菌感受态Stellar中,提取质粒进行PCR、酶切和测序鉴定.将重组质粒利用氯化钙法转化至无质粒的CMUT3中,荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的转化衣原体包涵体,经过氨苄西林筛选和噬菌斑纯化后,采用间接免疫荧光染色法检测转化株CMUT3-pGFP-mCherry-CM中pgp3和glgA蛋白的表达.结果 经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒,转化CMUT3后可见含有绿色和红色荧光的衣原体包涵体.氨苄西林筛选和噬菌斑实验纯化后得到新的转化株CMUT3-pGFP-mCherry-CM.免疫荧光证实pgp3和glgA蛋白在衣原体CMUT3-pGFP-mCherry-CM和CMUT3-pGFP∷CM中表达相似.结论 在质粒pGFP∷CM中成功加入开放读码框,转化衣原体后能够表达外源性基因,使衣原体转化技术能够用于衣原体蛋白质功能研究,为临床沙眼衣原体感染的防治提供新的线索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙毅娜	天津医科大学代谢病医院内分泌研究所	28	297	8.0	17.0