牦牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定

• 作者: 兰道亮 李键 林宝山 符梅 陈亚冰 黄偲
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 乳腺上皮细胞 培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 69-76
• 页数: 8页
• 分类号: S823.8+5|S813
• 字数: 5931字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.01.009

摘要

本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞系,并对建立的细胞系生物学特性进行鉴定,采用组织块种植法,分离培养乳腺上皮细胞;通过胰酶消化法纯化细胞;利用免疫荧光及Western blot技术对其进行鉴定;脂质体介导法将绿色荧光蛋白基因转染进乳腺上皮细胞中,荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白基因表达;金黄色葡萄球菌侵染牦牛乳腺上皮细胞,流式细胞仪(AnnexinV/PI双染法)检测乳腺上皮细胞的凋亡,RT-PCR检测感染细胞中抗菌肽以及凋亡因子表达.结果表明,分离纯化获得牦牛乳腺上皮细胞,细胞角蛋白18表达呈阳性,波形蛋白表达呈阴性,证明培养的细胞是上皮细胞并且没有成纤维细胞污染;β-酪蛋白表达呈阳性,说明建立的乳腺上皮细胞具有一定的泌乳功能;荧光显微镜能够检测到绿色荧光蛋白表达,表明EGFP基因成功导入了乳腺上皮细胞;金黄色葡萄球菌感染牦牛乳腺上皮细胞3h后,Annexin V/PI双染法检测发现感染组细胞凋亡率明显升高,差异显著(P＜0.05);感染细胞中TAP(P＜0.01)、BNBD5(P＜0.01)及BAX(P＜0.01)表达量明显增高,BCL-2(P＜0.05)表达量降低.综上表明,本研究成功建立了一株稳定的牦牛乳腺上皮细胞系,该细胞系能够作为研究牦牛乳腺发育及分化的体外研究模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李键	西南民族大学青藏高原研究院	117	464	10.0	15.0
2	黄偲	西南民族大学生命科学与技术学院	18	75	6.0	7.0
3	兰道亮	西南民族大学青藏高原研究院	46	196	7.0	10.0
4	林宝山	西南民族大学生命科学与技术学院	18	75	6.0	7.0
5	陈亚冰	西南民族大学生命科学与技术学院	22	91	6.0	8.0
6	符梅	西南民族大学生命科学与技术学院	8	32	4.0	5.0