虎杖查耳酮合酶基因RNAi载体的构建及其遗传转化

• 作者: 柳忠玉 赵树进
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 虎杖 查耳酮合酶 白藜芦醇苷 RNA干扰 转基因
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 412-417
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.03.020

摘要

目的 构建虎杖查耳酮合酶(PcCHS1)基因的RNA干涉(RNAi)表达载体,获得PcCHS1表达下调的转基因虎杖植株.方法 根据GenBank中已知的PcCHS1基因序列(EF090604),设计相应引物,克隆PcCHS1基因核心保守序列.以PcCHS1基因为靶基因,将长度574 bp保守序列片段通过正、反2个方向插入表达载体pYLRNAi中,构建RNAi表达载体pYLRNAi-PcCHS1.通过根癌农杆菌介导法将其导入虎杖茎尖组织.对获得的转基因植株,利用Northern blotting检测PcCHS1基因表达水平,并应用HPLC法测定虎杖中自藜芦醇苷的量.结果 成功构建PcCHS1基因RNA干涉表达载体,获得了5株转PcCHS1基因干涉载体的阳性植株.转基因虎杖PcCHS1基因表达水平显著下调,并且转基因植株中白藜芦醇苷量均得到显著提高,其中最高量是对照植株的3.8倍(P＜0.05).结论 成功获得了干涉PcCHS1基因表达下调的转化植株,抑制PcCHS1基因的表达显著增加了转基因虎杖中白藜芦醇苷的量,为有效利用该基因提高虎杖白藜芦醇苷量奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵树进		271	2349	23.0	37.0
2	柳忠玉	长江大学生命科学学院	20	34	4.0	4.0