经典型蛋白激酶Cγ及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺缺血损伤中的作用

• 作者: 李俊发 杨璇 章欣欣 陈璐勔 韩松 马维
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 原代培养小鼠脑皮层神经元 氧-糖剥夺 缺血损伤 经典型蛋白激酶Cγ 14-3-3γ 免疫印迹法 小鼠
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 145-150
• 分类号: R338
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2015.02.001

摘要

目的 探讨经典型蛋白激酶Cγ (cPKCγ)及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中的作用.方法 利用cPKCγ基因敲除(cPKCγ-/-)小鼠和原代培养脑皮层神经元1hOGD/24h复糖复氧(R)模拟离体细胞缺血模型,给予14-3-3γ抑制剂R18干扰,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹(Western blotting)和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,验证cPKCγ与14-3-3γ的相互作用及其对原代培养小鼠脑皮层神经元1h OGD/24h R缺血损伤的影响.结果 Co-IP结果证明,14-3-3γ与cPKCγ在小鼠脑皮层中确实存在相互作用;1h OGD/24h R处理使原代培养野生型(cPKCγ+/+)小鼠脑皮层神经元内cPKCγ蛋白水平明显降低,而14-3-3γ蛋白水平显著增加(P＜0.05,每组n=6);对于原代培养cPKCγ-/-小鼠脑皮层神经元,尽管14-3-3γ表达水平明显高于cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元,但1h OGD/24h R处理却使14-3-3γ表达水平显著降低(P＜0.05,每组n=6),提示cPKCγ可影响神经元内14-3-3γ的表达水平.此外,MTT结果表明,14-3-3γ抑制剂R18(1OOμmol/L)可显著加重1h OGD/24h R处理原代培养cPKCγ-/-和cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元的缺血损伤(P＜0.05,每组n=6).结论 cPKCγ与14-3-3γ在小鼠脑皮层神经元内存在相互作用并影响14-3-3γ的蛋白表达水平,cPKCγ和14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元缺血/低氧损伤中起保护作用.