Generation of insect-resistant and glyphosate-tolerant rice by introduction of a T-DNA containing two Bt insecticidal genes and an EPSPS gene

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 生物学
• 关键词: Bt基因堆叠 转基因水稻 EPSPS抗草甘膦基因 害虫抗性治理
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 页码范围: 824-831
• 页数: 8页
• 分类号: Q182
• 语种: 英文
• DOI: 10.1631/jzus.B1500056

摘要

题目：转Cry1Ac、Cry1Ig和EPSPS基因水稻及其抗虫、抗草甘膦活性鉴定<br>　　目的：获得具有高水平表达 Cry1Ac、Cry1Ig和 EPSPS基因并且具有抗虫、抗草甘膦活性的转基因水稻株。<br>　　创新点：Cry1Ig为新发现的苏云金杆菌（Bt）杀虫基因；Cry1Ig与 Cry1Ac共同使用有利于延缓害虫产生对Bt杀虫蛋白抗性。<br>　　方法：将Cry1Ac、Cry1Ig和EPSPS（G10）基因的表达框依次插入到同一转移 DNA（T-DNA）中，再将此 T-DNA 利用农杆菌介导法转化到水稻中。从转基因后代中，利用蛋白质印迹法（Western blot）、DNA印迹法（Southern blot）和热不对称交错聚合酶链式反应（TAIL-PCR）技术，筛选出能够高水平表达上述三个基因以及 T-DNA 单拷贝插入并且未发生明显插入突变的转化株。对于筛选到的转化株，利用 Western blot进一步分析 Cry1Ac、Cry1Ig和 G10基因的表达水平；使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测Cry1Ac的表达量；使用棉铃虫、二化螟和稻纵卷叶螟为对象，测定转基因水稻的抗虫活性；使用草甘膦喷施法，测定转基因水稻的抗草甘膦活性。最后，在大田试验中，考察转基因水稻与非转基因水稻的基本农艺性状，观察 T-DNA 的插入是否对转基因水稻的生长产生明显的影响。<br>　　结论：本实验最终获得具有高水平表达Cry1Ac、Cry1Ig和G10基因以及T-DNA单拷贝插入并且未引起明显变化的转化株 GAI-14。GAI-14对棉铃虫、二化螟、稻纵卷叶螟以及草甘膦均具有明显的抗性。田间试验表明 GAI-14在基本农艺性状上与非转基因水稻无明显差异。