柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法的建立及应用

• 作者: 孔德英 孙冬 孙涛 封立平 王简 纪瑛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: LAMP实时浊度检测方法 柑橘溃疡病菌 检测
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及防治
• 页码范围: 1153-1160
• 页数: 8页
• 分类号: S436.661.1
• 字数: 5736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.06.023

摘要

以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法.该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控.从镁离子浓度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价.结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66℃恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检.结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	封立平	山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	35	108	6.0	8.0
2	孔德英	重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心	15	75	4.0	8.0
3	纪瑛	山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	10	55	3.0	7.0
4	孙涛	重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心	6	35	3.0	5.0
5	王简	山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	10	19	3.0	3.0
6	孙冬	山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心	1	3	1.0	1.0