Cad11高和低表达肾癌细胞分选与Cad11对肾癌细胞迁移作用的影响

• 作者: 季擎天 李晓霞 钟启平
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Ⅱ型成骨细胞型钙黏附蛋白 分选 肾癌细胞 迁移
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 427-431
• 分类号: R737.11
• 语种: 中文

摘要

目的 分选Ⅱ型成骨细胞型钙黏附蛋白(cadherin-11,Cad11)高和低表达的肾癌细胞786-O细胞群,并证实Cad11在肾癌细胞786-O中的迁移作用.方法 将质粒pBMN-Ⅰ-GFP-Cad11转染于Phoenix细胞进行包装,之后感染786-O细胞,流式细胞仪分选后扩大培养建立786-LG细胞.将786-LG细胞经Cad11抗体2C7孵育后用BSA封闭,洗涤后加入标记APC的二抗,同时以786-LG细胞(未经任何处理)和786-LG细胞(只加入标记APC的二抗处理)作为阴性对照确定分选门,绿色荧光通道和红色荧光通道进行双参数分析,流式细胞仪分选技术筛选Cad11高和低表达的786-O肾癌细胞群,蛋白质印迹法检测分选细胞Cad11的表达.786-Cad11+和786-Cad11-细胞血清饥饿24 h后接种于内室(细胞数为1×104),每组设3个复孔,Transwell细胞迁移实验和细胞结晶紫染色计数穿过小室的细胞数目,以穿过膜的细胞数目评估Cad11对其肾癌细胞786-O的迁移作用.结果 成功构建786-LG细胞.流式细胞仪检测结果显示,786-LG细胞中Cad11阳性细胞亚群占细胞总数的75.98％.Cad11细胞群分选后,GFP+/APC+双阳性细胞和GFP+/APC-单阳性细胞分别占细胞总数的28.0％和20.1％.蛋白质印迹法检测结果表明,Cad11相对表达量786-LG细胞为0.25±0.02,786-Cad11+细胞为0.60±0.03,786-Cad11-细胞为0.10±0.01,差异有统计学意义,F=132.32,P＜0.001.与786-LG细胞相比,两个细胞亚群786-Cad11+和786-Cad11-中Cad11蛋白的表达量均有明显变化,前者蛋白表达量升高至2.41倍(P=0.007),后者蛋白表达量降低至0.41倍(P=0.004),差异均有统计学意义.Transwell迁移实验结果表明,786-LG细胞迁移数目为114.33±4.09,786-Cad11+细胞迁移数目为139.00±5.19,786-Cad11-细胞迁移数目为77.67±3.71,差异有统计学意义,F=49.65,P=0.000 2.结论 成功建立了高和低表达Cad11的786-O细胞模型,并证实Cad11的表达与肾癌细胞的迁移密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟启平	天津医科大学基础医学院微生物学教研室	30	243	8.0	14.0
2	李晓霞	天津医科大学基础医学院微生物学教研室	63	347	8.0	16.0
3	季擎天	天津医科大学基础医学院微生物学教研室	1	4	1.0	1.0