慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系

• 作者: 吴美善 庞新利 廖碧红 张键 李江华 熊玮 罗林杰 董少红
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 血管平滑肌细胞 趋化素 CMKLR1 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 组织构建细胞学实验
• 页码范围: 3195-3199
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.20.015

摘要

背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程.目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株.方法:以小鼠CMKLR1基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shRNA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shRNA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mRNA水平.结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/mL,pLVX-shRNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显著(P < 0.001).将pLVX-shRNA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mRNA水平,该细胞株中CMKLR1 mRNA水平显著下降(P < 0.001),表明慢病毒介导的siRNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达.