环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因

• 作者: 关丽 张丹 李鑫娜 王延群 聂凯 谭文杰 马学军
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 环介导逆转录等温扩增 中东呼吸综合征冠状病毒
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 269-275
• 页数: 7页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测.针对MERS CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60 min扩增反应.通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定.本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR (rRT-PCR)进行比较.结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系.基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝.因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭文杰		89	243	9.0	12.0
2	马学军		40	227	8.0	14.0
3	聂凯		11	19	3.0	4.0
4	关丽		6	6	2.0	2.0
5	王延群		6	41	4.0	6.0
6	李鑫娜		4	6	2.0	2.0
7	张丹		2	0	0.0	0.0