四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性

• 作者: 丁伟峰 冯颖 张欣 李娴 王成业 谢世聪
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 达摩凤蝶 新孵幼虫 昆虫细胞系 分泌型碱性磷酸酶 重组杆状病毒
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 826-835
• 分类号: Q965.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.08.002

摘要

[目的]建立达摩凤蝶Papilio demoleus Linnaeus新孵幼虫细胞系,并对其生物学特性进行研究.[方法]使用改良配方的Grace培养基并辅以20％胎牛血清,通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系.通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定,获得4个新建细胞系的生物学特性数据.使用Bac-To-Bac@杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP).使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的半数组织培养感染剂量(TCID50),比较达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的敏感性.[结果]建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系(RIRI-PaDe-1,RIRI-PaDe-2,RIRI-PaDe-3及RIRI-PaDe-4),且均传至60代以上.形态学方面,细胞系RIRI-PaDe-1和RIRI-PaDe-4较为相近,均由圆形、梭形以及多边形细胞组成,细胞系RIRI-PaDe-2主要为圆形细胞,而RIRI-PaDe-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞.细胞增殖动力学方面,4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77,67.42,81.48及65.43 h.核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布,其中RIRI-PaDe-2,RIRI-PaDe-3以及RIRI-PaDe-4的染色体数目分布区间比较接近,在45～97条之间,RIRI-PaDe-1的染色体条数相比偏少,在36 ～ 90条之间.通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因序列,证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织.比较4个细胞系对AcMNPV-SEAP敏感性发现RIRI-PaDe-3对此病毒较为敏感,可作为重组杆状病毒表达的宿主.[结论]虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同,具有相同的遗传背景,但其生物学特征仍有明显差异,具有进一步研究的价值.