尼罗罗非鱼3种Siglecs like融合蛋白在COS-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究

• 作者: 卢迈新 叶星 孙成飞 田园园 董浚键 魏远征
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 唾液酸结合型免疫球蛋白样凝集素 重组蛋白 真核表达 结合活性
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 327-335
• 分类号: Q786|S965
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20140909492

摘要

为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制.本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)hIgG1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞.qPCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率.ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性.测序结果显示,成功构建3个融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)hIgG1 Fc-Siglecs like/Ex.检测结果显示,转染细胞中3个Siglecs/Ex-Fc融合蛋白在mRNA和蛋白水平都有高效表达,且过柱后的融合蛋白具有较高纯度;3个融合蛋白与罗非鱼源GBS的结合活性较对照组均有显著差异.研究表明,利用真核表达系统成功制备了具有较高纯度的尼罗罗非鱼3种Siglecs融合蛋白,且均有与GBS的结合活性.