猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

• 作者: 包文斌 吴圣龙 喻礼怀 夏日炜 朱国强 殷学梅 訾臣
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 MyD88基因 基因沉默 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 657-664
• 页数: 8页
• 分类号: S852.2
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.021

摘要

髓性分化因子88 (MyD88)作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白,在免疫应答和疾病防御中起重要作用,作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞,为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型.共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体,通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平,筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体,将其包装成慢病毒载体,用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞.最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3％的小肠上皮细胞,达到基因功能分析的要求.MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得,为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料.