溶藻弧菌毒力菌株SSH文库的构建

• 作者: 梅冰 王世峰 谢珍玉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 农学
• 关键词: 溶藻弧菌 毒力 抑制性差减杂交 毒力基因 致病机理
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 458-462
• 页数: 5页
• 分类号: S943
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2015.05.0091

摘要

[目的]通过构建基因文库为溶藻弧菌毒力基因的鉴定、致病机理的阐明奠定基础.[方法]应用抑制性差减杂交技术(suppression subtrative hybridization,SSH),以毒力菌株HN08155为测试子(Tester),构建了溶藻弧菌毒力菌株HN08155的SSH差减文库.[结果]文库共含有2 873个克隆;通过菌落PCR鉴定,2 786个克隆能扩增出250 ～1000bp大小的目标片段;通过Southern斑点杂交,确定毒力菌株特异基因的阳性克隆347个,经测序和同源性比对分析,其中135个克隆的序列含有已知的77个基因,其中46个基因主要为代谢途径的多种酶类的编码基因,23个基因为其它基因,8个为毒力相关功能基因.[结论]这些毒力相关功能基因包括丝氨酸蛋白酶基因prkA、热休克蛋白基因dnaJ、趋化因子基因cheW、甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein)基因、双组分感应子(two-componentsensor)基因、Ⅳ型菌毛(typeⅣpilin PilA)基因、生物膜相关的表面蛋白(biofilm-associated surface protein)基因和外膜蛋白(outer membrane protein)基因;该文库中还含有166个未知新基因,占文库中总基因数的68.44％,溶藻弧菌的毒力基因很可能存在于这个文库中的未知新基因中.