视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用

• 作者: 袁源 陈亚琼
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 视黄酸 RARE 荧光素酶报告基因 节律 代谢
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 209-215
• 页数: 7页
• 字数: 5873字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.033

摘要

类维生素A，通过视黄酸（retinoic acid，RA）代谢旺盛组织的靶基因调控，与生物节律通路相互作用，在代谢性疾病发展过程中发挥着重要作用。在293T及小鼠肝原代细胞中，构建视黄酸反应元件（RARE）调控的荧光素酶报告基因表达系统，为研究类维生素A与节律和代谢研究中靶基因上游调控信号分子提供可能。用定点突变PCR方法在pGL3-Basic载体中插入RARE片段，检测报告基因表达及RARE对视黄酸响应的半数有效浓度（EC50），初步筛选可能调控RARE的靶基因，通过酶切连接将荧光素酶报告基因Luciferase和启动子RARE片段构入穿梭载体pShuttle，转入感受态细胞BJ518获得重组腺病毒载体Ad-Basic-RARE-Luc，转染MGH细胞并进行扩增，在小鼠肝原代细胞检测腺病毒活性。结果显示，构建的RARE调控的荧光素酶报告基因表达载体在293T细胞可被RA刺激，RARβ促进RA刺激RARE表达，而CRY1抑制RARE-Luc对RA的响应，并成功构建了在小鼠肝原代细胞响应RA刺激的Adeasy-Basic-RARE-Luc腺病毒载体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁源	中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所	4	18	3.0	4.0
2	陈亚琼	中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所	8	118	5.0	8.0