哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达

• 作者: 丁燏 吴灶和 朱帆 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 哈氏弧菌 谷胱甘肽还原酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 183-188
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.06.029

摘要

经克隆哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶（GR）基因，并构建其原核表达载体，以获得相应的表达蛋白。将GR和pET-32a（+）通过BamH I和Xho I双酶切后，体外用T4连接酶连接，构建重组质粒pET-GR；然后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，应用SDS-PAGE分析表达情况和表达条件。SDS-PAGE电泳获得分子量约为68.9 kD融合蛋白条带。在E.coli BL21（DE3）中重组质粒pET-GR的表达条件为28℃，0.7 mmol/L的IPTG浓度诱导4 h表达量最高，且主要以包涵体形式表达。哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因在大肠杆菌中获得了高效表达。