辣椒脉斑驳病毒侵染性克隆构建的简易方法

• 作者: 刘健 吴阳晨 席德慧 朱桐 林宏辉 赵霏霏 陈应娟
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 辣椒脉斑驳病毒 侵染性克隆 体外转录 重叠PCR
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 1151-1156
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4177字
• 语种: 中文
• DOI: 103969/j.issn.0490-6756.2015.09.036

摘要

本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)侵染性克隆的简易方法.基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列,根据基因内部的单一限制性酶切位点,设计引物,将ChiVMV分成KL1,KL2,KL3三个片段通过RT-PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19-T载体上.通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上,从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中,成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象.进行体外转录时,先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段,再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA,并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林宏辉	四川大学生命科学学院	88	991	17.0	29.0
2	席德慧	四川大学生命科学学院	15	82	5.0	8.0
3	刘健	四川大学生命科学学院	13	109	4.0	10.0
4	陈应娟	四川大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
5	朱桐	四川大学生命科学学院	5	6	2.0	2.0
6	赵霏霏	四川大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0
7	吴阳晨	四川大学生命科学学院	3	7	2.0	2.0