传染性造血器官坏死病毒抗原表位富集区的原核表达及应用

• 作者: 刘淼 刘红柏 卢彤岩 尹家胜 徐黎明 曹永生 赵景壮 陶健
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死病毒 G 蛋白 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 分类号: S941.41
• 字数: 5846字
• 语种: 中文

摘要

以传染性造血器官坏死病毒 Sn1203株（IHNV－Sn1203）基因组 RNA 提取物为模板，利用生物信息学软件分析，通过 RT－PCR 一步法扩增截短的 G 蛋白基因序列（约375 bp），将其克隆到表达载体 pET－27b 中，构建重组表达质粒 pET－27b－IHNV－short G，通过大肠杆菌 Rosetta 表达菌株获得高效表达。在 IPTG 浓度为0．25 mmol／L 时，37℃诱导表达，经 SDS－PAGE 电泳分析显示目的蛋白相对分子质量约为14000，符合预期大小，并以包涵体的形式表达，4 h 时目的蛋白表达量最大。蛋白经变性、复性处理后获得不带任何标签的纯化蛋白，并利用该蛋白制备兔抗血清。 ELISA 结果显示，兔抗血清的效价为1∶80000，说明制备的兔抗血清能够识别表达的重组蛋白；间接免疫荧光结果表明兔抗 G 蛋白血清具有良好的特异性，并且与 VHSV 参考毒株没有任何交叉反应。