促红细胞生成素衍生肽抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的作用研究

• 作者: 余文军 司瑞 张明明 张荣庆 王海昌 王琛 郝启萌
• 来源期刊: 中国循环杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 促红细胞生成素衍生肽 心肌微血管内皮细胞 缺血/再灌注损伤 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 基础与实验研究
• 页码范围: 280-284
• 页数: 5页
• 分类号: R54
• 字数: 3906字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-3614.2015.03.020

摘要

目的：探讨促红细胞生成素衍生肽（HBSP）抑制大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）缺血/再灌注损伤的作用及其机制。 <br>　　方法：分离培养大鼠CMECs，建立缺血/再灌注损伤模型，随机分为对照组、模拟缺血/再灌注组（SI/R组）、SI/R＋重组人促红细胞生成素组（SI/R+rhEPO组）、SI/R＋HBSP组；HBSP分别选择2.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml四个浓度，通过噻唑蓝（MTT）比色实验检测CMECs增殖能力以确定药物作用的最适浓度。而后采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法检测细胞凋亡率来进一步验证其保护作用。研究保护机制的实验分组为：对照组、SI/R组、SI/R＋HBSP（HBSP最适浓度为25 ng/ml）组、SI/R+HBSP+磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）组、SI/R+HBSP+雷帕霉素组，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核糖体S6蛋白激酶（p70S6K）等蛋白的表达及其磷酸化水平。 <br>　　结果：与SI/R组比，SI/R+rhEPO组和SI/R+HBSP组CMECs增殖能力明显上升（P<0.05），凋亡率显著下降（P<0.01），迁移能力增强。用抑制剂LY294002及雷帕霉素处理后，与SI/R组相比，SI/R+HBSP组AKT、mTOR及p70S6K的磷酸化水平均显著提高（P<0.05）；与SI/R+HBSP组相比，SI/R+HBSP+LY294002组的AKT、mTOR及p70S6K的磷酸化水平均显著下降（P<0.05），SI/R+HBSP+雷帕霉素组mTOR磷酸化水平及p70S6K磷酸化水平显著下降（P<0.05）。 <br>　　结论：HBSP能够抑制缺血/再灌注诱导的CMECs的损伤，其保护作用可能与PI3K-AKT/mTOR信号通路激活有关。