稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建

• 作者: 侯继波 冯磊 吴培培 王伟峰 褚轩 陈丽
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: MDCK细胞 稳定转染 跨膜型丝氨酸蛋白酶 禽流感病毒
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 1084-1090
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 5655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.05.022

摘要

为了构建能稳定表达人Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)的重组MDCK细胞,并考察该重组细胞株对禽流感H9亚型病毒的增殖能力,采用基因工程的方法,将TMPRSS2基因克隆入真核表达载体中获得重组表达载体pIRES-TMPRSS2。采用25000线性PEI进行悬浮生长MDCK细胞的转染操作,经两轮G418抗性筛选获得能够稳定表达该蛋白质的重组MDCK-Sus-TMPRSS2细胞。 RT-PCR、Western blot以及间接免疫荧光检测( IFA)的结果显示,TMPRSS2已在该重组细胞株中正常表达。该重组细胞的悬浮比生长速率达到0.438 d-1；在3 L反应器中,最大细胞密度可达到1 ml 6.83×106个。在对6株禽流感H9亚型病毒的连续盲传试验中,经MDCK-Sus-TMPRSS2细胞盲传的子代病毒可以获得较高的血凝效价和半数组织感染滴度。