全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因多态性

• 作者: 刘云龙 初亚男 周国华 宋沁馨 邢晓清 项铮
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 全血直接扩增 线性指数聚合酶链式反应 焦磷酸测序 基因多态性 酒精代谢
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研 究 报 告
• 页码范围: 55-62
• 页数: 8页
• 字数: 5592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253_3820.140395

摘要

焦磷酸测序是目前基因多态性检测的主要方法之一,但是其前期的样本制备工作较为繁琐,限制了其在临床检测中的应用。为了简化焦磷酸测序的流程,本研究根据不对称PCR原理,改进了线性指数聚合酶链式反应( LATE_PCR)的引物设计方法,增加过量引物的长度和浓度,并结合全血直接扩增技术,建立了基于普通rTaq聚合酶和高pH 缓冲液( HpH Buffer)的全血改进LATE_PCR( Improved LATE_PCR, imLATE_PCR)方法。考察了方法的最优扩增体系、血液抗凝剂对其影响以及全血模板量。采用单管、一步法直接扩增出单链测序模板,成功地对24例临床血样的乙醇脱氢酶基因多态性进行了检测,检测结果可用于指导临床个体化用药。24例样本的基因型分别为ADH1B位点AA纯合6例、AG杂合14例、GG纯合4例； ADH1C位点GG纯合20例、AG杂合4例、AA纯合0例。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云龙	南京大学医学院附属金陵医院药理科	2	5	2.0	2.0
2	初亚男	南京大学医学院附属金陵医院药理科	2	22	2.0	2.0