红花2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶基因的克隆及表达分析

• 作者: 代斯宁 官丽莉 崔琪 李校堃 李海燕 王文玲 韩怡来 顾天瑶 齐冬梅
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶 RACE 实时荧光定量PCR 红花 维生素E
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2774-2780
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.18.019

摘要

目的 克隆红花维生素E合成相关关键酶2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQ MT)基因,并进行生物信息学及表达分析,为红花维生素E生物合成及调控机制研究奠定基础.方法 根据红花种子转录组数据库中得到的中间序列,采用RT-PCR和RACE方法从红花种子中克隆MPBQ MT基因序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建MPBQMT与相关物种MPBQ MT的系统进化树,利用RT-PCR方法分析在红花种子不同发育时期MPBQ MT基因的表达量.结果 MPBQ MT基因全长1 392 bp,命名为CtMPBQ MT,具有完整的开放阅读框(ORF),共1 038 bp,编码345个氨基酸.生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白理论相对分子质量约为38 900.保守结构域预测表明,该基因编码的蛋白具有典型的SAM蛋白功能结构域.结合其他物种的MPBQ MT基因构建系统树表明,红花MPBQ MT基因与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其中与向日葵和生菜同源性高达89％和86％.实时荧光定量PCR分析表明,MPBQ MT基因在红花开花后50 d的种子中表达量最高.结论 成功地对MPBQ MT基因进行克隆及表达分析,为红花维生素E合成及调控机制研究奠定基础.