棉铃虫Wnt-1基因克隆、多克隆抗体制备及在滞育和非滞育蛹脑中的表达检测

• 作者: 徐卫华 陈伟
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉铃虫 Wnt1 滞育 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 15-21
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.01.002

摘要

[目的]Wnt1蛋白是Wnt/β-catenin信号通路的重要成员.本研究旨在克隆棉铃虫Helicoverpa armigera Wnt1基因,制备多克隆抗体,进而从蛋白水平初步研究该蛋白在滞育和非滞育蛹脑中的表达情况.[方法]通过RACE的方法克隆棉铃虫Wnt1基因.根据获取的序列构建Wnt1的真核表达载体并调查其亚细胞定位,同时构建原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达、纯化后免疫兔子,制备多克隆抗体.最后用Western blot的方法检测Wnt1蛋白在两种发育状态蛹脑中的表达情况.[结果]成功克隆了棉铃虫Wnt1基因(GenBank登录号为KJ206240).Wnt1定位在细胞质,通过镍柱纯化获得了较纯的重组蛋白.制备的Wnt1抗体效价高达1∶625 000.Western blot结果表明滞育蛹脑中Wntl蛋白水平明显低于非滞育蛹脑.[结论]获得了高效价的棉铃虫Wnt1多克隆抗体.我们的结果表明滞育蛹脑中Wnt/β-catenin通路很有可能受到抑制.本研究结果为进一步深入研究棉铃虫Wnt/β-catenin信号通路在棉铃虫发育中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	广东药学院生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室	20	51	4.0	6.0
2	徐卫华	中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室	12	108	3.0	10.0