鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选

• 作者: 卢卫嘉 张超 毛晓燕 熊颖 王建锋 秦海艳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示 E型肉毒毒素 抗体库 单链抗体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 59-63,67
• 页数: 6页
• 分类号: R392.1
• 字数: 5499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.01.011

摘要

目的:构建鼠源E型肉毒毒素(BoNT/E)免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体.方法:从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M13K07的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定.结果:鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×107,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85％,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体.结论:构建了库容量达7.09× 107的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张超		8	20	3.0	4.0
2	秦海艳		6	40	2.0	6.0
3	王建锋		3	9	2.0	3.0
4	熊颖		8	15	2.0	3.0
5	卢卫嘉		4	21	3.0	4.0
6	毛晓燕		17	72	4.0	7.0