受多逆境诱导表达的GhWRKY64基因启动子克隆与功能分析

• 作者: 丁林云 何曼林 杜皓 蔡彩平 郭旺珍
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: GhWRKY64启动子 逆境胁迫 转基因烟草 调控元件 GUS活性
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子遗传学
• 页码范围: 593-600
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2015.00593

摘要

WRKY 蛋白属于锌指型转录调控因子,参与植物生长发育及耐逆响应。以陆地棉遗传标准系 TM-1为材料,克隆GhWRKY64(KF031101)基因上游1064 bp的启动子序列,并对其调控元件及功能进行分析。生物信息学分析表明,该区域含18个组织器官表达及诱导表达关键元件,分别为6个ROOTMOTIFTAPOX1根特异调控元件,4个CACTFTPPCA1叶肉特异性调控元件、4个 OSE2ROOTNODULE 病菌诱导元件、2个 GTIGMSCAM4盐调控元件和2个W-box胁迫应答响应元件。将该启动子与GUS基因融合,构建pBIW64：GUS植物表达载体,通过农杆菌介导叶盘转化法获得12个转基因烟草株系。选择GUS表达量最高的pBIW64-5进行转基因不同组织器官表达及诱导表达分析。GUS组织化学染色显示,苗期的转基因烟草植株在叶和根部均具有GUS活性,开花期在转基因烟草植株根、叶及叶柄均检测到GUS活性,特别在转基因烟草的根及根尖部分染色更深,在茎和花组织上未检测到GUS活性。对该转基因烟草幼苗进行黄萎病菌诱导处理,诱导48 h后,转基因烟草幼苗根和叶片的GUS染色比未诱导处理的对照明显加深。结果表明,GhWRKY64上游1064 bp长度的DNA序列，具有启动子的相关顺式作用元件，且为病原菌诱导型启动子。该启动子可为开展棉花抗黄萎病转基因研究提供调控元件。