人尿道上皮细胞T7噬菌体展示cDNA文库的构建与鉴定

• 作者: 何军 曾焱华 朱有葱 朱翠明 李冉辉 游晓星
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: SV-HUC-1细胞 cDNA T7噬菌体展示文库
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 151-154
• 页数: 4页
• 分类号: R375+.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2015.02.031

摘要

[目的]构建人尿道上皮细胞(SV-HUC-1)T7噬菌体展示cDNA文库,为研究人尿道上皮细胞与生殖道感染病原体的相互作用奠定基础.[方法]用Trizol试剂提取SV-HUC-1细胞总RNA,分离纯化出mRNA,经反转录合成得到其双链cDNA,在双链cDNA末端加上定向的EcoR Ⅰ/HindⅢ黏性末端,然后收集并纯化200bp以上的双链cDNA片段,连接于T7噬菌体载体,经体外包装后转入BLT5403宿主菌,T7噬菌体展示cDNA文库构建成功.[结果]将文库扩增后,用噬斑试验检测其库容,结果为1.2×106pfu/cm3.用PCR鉴定随机挑取的噬菌斑,计算其重组率达93.75％,且插入片段都大于200bp.[结论]成功构建了SV-HUC-1细胞T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步研究泌尿生殖道感染病原体与人尿道上皮细胞的相互作用奠定了前期实验基础.