马铃薯5种病毒多重PCR检测技术的建立及应用

• 作者: 刘中华 李华伟 汤浩 纪荣昌 罗文彬 许泳清 邱思鑫 邱永祥
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯 病毒 检测方法 多重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 蔬菜
• 页码范围: 280-288
• 分类号: S532
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0807

摘要

采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法.根据GenBank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS (CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化,建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重RT-PCR方法.该方法能同时扩增出PVX、PVM、PVY、PVA及PVS特异片段,其大小分别是138、213、369、468和657 bp.测序结果表明,5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97％以上.灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测植物组织量为103 mg.应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品和组培苗进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒.