甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶1(SeCDA1)在毕赤酵母中的表达与活性测定

• 作者: 孙晓彤 徐大庆 李少雅 李景 赵丹 郭巍 闫晓平
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甜菜夜蛾 几丁质脱乙酰酶 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 586-591
• 分类号: S763.42
• 语种: 中文
• DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2015.04.021

摘要

利用RACE-PCR方法,扩增得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰基酶基因secda1.将secda1基因插入到载体pPIC9K多克隆位点,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,得到重组质粒pPIC9K-secda1.重组质粒经线性化后,电击转化缺陷性毕赤酵母GS115感受态细胞,构建含有目的基因的重组酵母菌株.经甲醇诱导表达,Western blot分析后表明secda1基因在毕赤酵母GS115中成功表达80 kDa蛋白.脱乙酰基酶活性测定结果显示重组蛋白酶活力为1.35 U/mL.利用RT-PCR对该基因进行mRNA水平上的表达分析,结果表明secda1在幼虫取食期的头、表皮、中肠、马氏管、脂肪体及蛹期虫体均有表达;本研究利用毕赤酵母成功表达具有酶活力的重组SeCDA1蛋白,为进一步明确SeCDA1蛋白的生理功能提供条件,并为以SeCDA1蛋白为靶标更有效地防治甜菜夜蛾提供理论依据.