柱花草炭疽菌致病力丧失突变菌株1869的T-DNA 插入位点侧翼序列的克隆

• 作者: 习金根 吴伟怀 张晓波 戚山江 易克贤 李秋洁 梁艳琼 许沛冬 贺春萍 赵艳 郑肖兰 郑金龙
• 来源期刊: 草业学报
• 关键词: 柱花草 炭疽菌 T-DNA 致病力 基因克隆
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 142-149
• 页数: 8页
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb2015094

摘要

通过对实验室已构建的柱花草炭疽菌 T-DNA 突变体库中各转化子致病力的测定，获得致病力丧失突变菌株1869。对其进行 PCR 检测以验证 T-DNA 在1869基因组中插入情况，并测定观察其菌落直径、菌落形态及产孢量等生物学特性，利用 TAIL-PCR 克隆标记基因侧翼序列，采用生物信息学方法比对基因信息。结果表明，与柱花草炭疽菌野生型菌株 CH008相比，突变菌株1869表现致病力丧失，菌落生长速率也显著低于野生型；然而，在分生孢子形态、产孢能力、孢子萌发率等方面与野生型并无明显差异。TAIL-PCR 扩增得到 T-DNA 插入位点 RB 端序列467 bp，LB 端侧翼序列388 bp，经两侧序列拼接比对，所得序列与 Pac1同源性达到92％～96％，推测可能由于基因表达产物调节菌株对 pH 值的敏感性，从而影响了其致病过程。