酶解制备日本沼虾游离精子方法的研究

• 作者: 乔慧 傅洪拓 孙盛明 熊贻伟 白鸿坤 蒋速飞 金舒博 颜跃弟 龚永生
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本沼虾 精荚 游离精子 胰蛋白酶 正交试验
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 水产·渔业
• 页码范围: 107-111
• 分类号: S931
• 语种: 中文

摘要

为了获得数量多且存活的游离青虾精子,首次采用胰蛋白酶消化日本沼虾精荚的方法,获得了游离日本沼虾的精子.通过观察游离精子形态,并经台盼蓝染色,以每克精荚所获得形态正常、结构完整且不被染色的存活精子数为依据,探究胰蛋白酶处理的最佳条件.在pH 7.1的条件下,设计三因素四水平正交试验,设置不同酶浓度(0.2％、0.4％、0.6％、0.8％)、处理时间(5 min、10 min、15 min、20 min)和处理温度(30℃、35℃、40℃、45℃),根据正交试验结果确定酶处理最佳反应条件.结果表明,酶浓度对获得游离精子影响最大,其次是处理温度和处理时间.酶处理的最适条件为:酶浓度0.8％,处理时间10min,处理温度40℃.经优化验证试验,表明上述理论组合确为最佳组合.本研究通过酶解法获得较多数量的存活游离精子,为进一步研究日本沼虾精子提供了获得游离精子的方法.