RNA干扰MDC1基因对食管癌细胞X线照后细胞周期及相关蛋白表达影响

• 作者: 刘志坤 李娟 沈文斌 祝淑钗 苏景伟
• 来源期刊: 中华放射肿瘤学杂志
• 关键词: 食管癌细胞 RNA干扰 MDC1基因 细胞周期相关蛋白 放射敏感性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 物理?生物?技术
• 页码范围: 708-713
• 页数: 6页
• 字数: 4689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1004-4221.2015.06.025

摘要

目的：利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1基因表达，观察照射后细胞周期和放射敏感性变化并探讨相关机制。方法针对MDC1mRNA序列设计合成3对有效干扰序列和阴性对照序列，与载体pSIH1?H1?copGFP形成重组质粒，RT?PCR和蛋白印迹法测定MDC1mRNA和蛋白水平表达。克隆形成实验检测细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞周期，蛋白印迹法检测CHK1、CHK2蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察细胞核内MDC1斑点数量。单因素方差分析组间差别。结果成功构建 pMDC1?shRNA 质粒并感染 ECA109细胞，获得稳定转染细胞 ECA109M。ECA109M细胞MDC1mRNA、蛋白表达水平低于ECA109N、ECA109细胞（ P＝0．032、P＝0．041）。5 Gy照射后 ECA109M 细胞 G2＋M 期比例低于 ECA109N、ECA109（P＝0．026）。5 Gy 照射后 ECA109、ECA109N、ECA109M细胞中CHK1和CHK2蛋白表达相近（P＝0．345和P＝0．451），ECA109M 细胞CHK2T68蛋白表达低于ECA109、ECA109N细胞（ P＝0．012）。 ECA109细胞D0值为3．06 Gy，SF2值为0．91；ECA109N、ECA109M细胞的D0值分别为2．90、1．88 Gy；SF2值分别为0．89、0．84（ P＝0．021；P＝0．037）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可以降低细胞周期相关蛋白的表达，解除细胞周期阻滞，增强食管癌细胞ECA109的放射敏感性。