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miR-142-3p调控高迁移率族蛋白1及对神经母细胞瘤顺铂化疗敏感性的影响
miR-142-3p调控高迁移率族蛋白1及对神经母细胞瘤顺铂化疗敏感性的影响
作者:
周显军
崔楷悦
朱永洁
李晓
段于河
沈峰
耿耿
董蒨
陈鑫
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
神经母细胞瘤
药物疗法,联合
基因表达调控
摘要:
目的 研究miR-142-3p靶向调控高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)及其对神经母细胞瘤细胞顺铂(CDDP)化疗敏感性影响的分子机制.方法 ①构建神经母细胞瘤耐药细胞株SH-SY5 Y/CDDP,RT-PCR检测细胞内miR-142-3p的表达水平;②CCK8和Elisa检测过表达miR-142-3p对耐药细胞株SH-SY5 Y/CDDP的凋亡和IC50水平的影响;③构建HMGB1 3'UTR区荧光素酶报告载体,验证miR-142-3p对HMGB1的靶向调控作用;④Westernblot检测转染miR-142-3p后SH-SY5Y细胞中HMGB1的表达水平;⑤利用siRNA敲减耐药细胞株SH-SY5 Y/CDDP中HMGB1的表达,Western-blot检测siRNA的敲减效果,CCK8和Elisa方法检测SH-SY5 Y/CDDP细胞的IC50和凋亡情况.结果 ①构建神经母细胞瘤耐药细胞株SH-SY5 Y/CDDP成功,耐药细胞株IC50由原来的(4.57±0.65) μg/ml增加到(23.53±3.87) μg/ml,比非耐药细胞株提高了5.15倍;RT-PCR结果显示耐药的SH-SY5Y/CDDP细胞株中miR-142-3p表达水平显著低于正常的SH-SY5Y细胞,差异有统计学意义(P<0.01).②Elisa结果显示,过表达miR-142-3p后,与转染Control mimics组相比,耐药细胞株SH SY5Y/CDDP细胞用CDDP处理后凋亡水平升高,IC50显著降低(7.02±1.38 vs 24.27±4.13)μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);③荧光素酶活性检测表明miR-142-3p能够显著抑制HMGB1的荧光素酶活性(P<0.01);④Western-blot结果显示,在SH-SY5Y细胞中过表达miR-142-3p后,细胞中HMGB1蛋白水平明显下调(P<0.01),miR-142-3p与HMGB1的表达呈负相关;⑤两条siRNA敲减HMGB1后,SH-SY5 Y/CDDP耐药细胞株用CDDP处理后凋亡水平升高,细胞的IC50由对照组的(24.61±4.07) μg/ml,分别下降到(9.65±1.39)μg/ml和(8.43±1.76)μg/ml,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-142-3p的靶基因为HMGB1,miR-142-3p能够通过靶向调控HMGB1的表达而增加神经母细胞瘤细胞对CDDP化疗的敏感性.
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篇名
miR-142-3p调控高迁移率族蛋白1及对神经母细胞瘤顺铂化疗敏感性的影响
来源期刊
中华小儿外科杂志
学科
关键词
神经母细胞瘤
药物疗法,联合
基因表达调控
年,卷(期)
2015,(6)
所属期刊栏目
实验研究
研究方向
页码范围
466-471
页数
6页
分类号
字数
3586字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2015.06.015
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作者信息
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青岛大学附属医院小儿外科
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研究去脉
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中华小儿外科杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0253-3006
CN:
42-1158/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市胜利街155号
邮发代号:
38-19
创刊时间:
1980
语种:
chi
出版文献量(篇)
8600
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20
总被引数(次)
37634
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