转人AT-Ⅲ猪骨髓间充质干细胞抑制异种移植凝血紊乱的体外研究

• 作者: 张卓超 李霄 汪建林 王德盛 王璟 窦科峰 纪洪辰 陶开山 马奔
• 来源期刊: 中华器官移植杂志
• 关键词: 间充质干细胞 抗凝血酶Ⅲ 基因修饰 凝血酶 移植,异种 猪
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 129-134
• 页数: 6页
• 字数: 4990字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2015.03.001

摘要

目的 观察转染人抗凝血酶-3 (hAT-Ⅲ)的猪骨髓间充质干细胞(MSC)在体外异种移植凝血模型中的抗凝血作用.方法 提取α-1,3-半乳糖转移酶基因敲除小型猪的MSC,利用流式细胞术鉴定其表型.构建含hAT-Ⅲ的慢病毒载体,转染MSC,使其表达hAT-Ⅲ,分别应用逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法和免疫荧光技术检测hAT-Ⅲ的表达情况.在体外人血浆和猪内皮细胞共培养体系中,分别加入转染空质粒MSC(空转染组)、转染hAT-ⅢMSC(转染组)、重组hAT-ⅢMSC(重组hAT-Ⅲ组)和经鼠抗hAT-Ⅲ阻断性抗体处理的转染hAT-Ⅲ MSC(抗hAT-Ⅲ组),并提取上清液检测凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)的含量,并进行复钙实验,检测凝集时间.结果 提取的细胞具有MSC表型,转染后成功表达hAT-Ⅲ基因,实验组相对表达量为2.80±0.51.空转染组、转染组、重组hAT-Ⅲ组和抗hAT-Ⅲ组TAT含量为(4.33±1.20) ng/ml、(15.00±2.89)ng/ml、(22.67±1.45) ng/ml、(3.02±1.16)ng/ml;在凝血模型中转染组TAT含量高于空转染组和抗hAT-Ⅲ组(P＜0.05).空转染组、转染组、重组hAT-Ⅲ组和抗hAT-Ⅲ组的凝集时间为(150.0±4.58)s、(172.0±5.51)s、(181.3±4.06)s和(132.7±6.12)s;转染组凝集时间少于空转染组和抗hAT-Ⅲ组(P＜0.05).结论 基因修饰的MSC能够表达hAT-Ⅲ,并可以有效抑制体外异种移植凝血模型中人血浆中的凝血酶.