CGRP修饰MSCs对大鼠颈动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

• 作者: 石蓓 赵然尊 邓文文 陈攀科 龙仙萍
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 降钙素基因相关肽 间充质干细胞 血管平滑肌细胞 增殖 血管狭窄
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1619-1624
• 页数: 6页
• 字数: 3623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2015.20.018

摘要

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)修饰的间充质干细胞(MSCs)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管狭窄的影响.方法 培养应用MSCs与VSMCs,Lv-CGRP-EGFP转染MSCs,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测MSCs中CGRP的表达.MSCs与VSMCs共培养后,实验分为MSCsCGRP+/++ VSMCs组、MSCsCGRP-/-+ VSMCs和MSCsPBS+VSMCs组,应用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)法检测VSMCs增殖能力.构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,携带慢病毒的MSCs移植动物模型中,细胞移植后7d,Western印迹法检测血管中CGRP表达,免疫荧光染色检测损伤血管CD31的表达;细胞移植后28 d,苏木精-伊红染色法(H-E染色)检测损伤血管新生内膜/中膜面积;免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 病毒转染后48 h,与PBS组比较,CGRP修饰的MSCs中CGRP的mRNA(0.135±0.049比25.306±0.110)和蛋白水平(1.953±0.039比19.483±0.421)均增高(均P＜0.05).细胞共培养后24、48、72、96 h,MTT染色显示,与MSCsPBS+ VSMCs组比较,MSCsCGRP+/++ VSMCs组中VSMCs的增殖活性明显减弱[24 h(0.54±0.06比0.44±0.06),48 h(0.69 ±0.11比0.54±0.07),72 h(0.87±0.08比0.70 ±0.11),96 h(1.42±0.28比1.10±0.24)均P＜0.05].体内研究显示:细胞移植后7d,与对照组比较,MSCs-CGRP移植组中CGRP表达水平明显增加(23.953±3.039比50.451±5.311)(均P＜0.05),免疫荧光染色检测显示MSCs-CGRP组内膜有CD31连续性表达,而对照组没有.细胞移植后28 d,HE染色显示,与对照组(0.99±0.06)比较,MSCs-CGRP组(0.48±0.03)血管增生内膜面积明显减小(均P＜0.05),免疫组化结果显示,MSCs-CGRP组中血管内膜的PCNA表达量较对照组明显降低(78.4％±10.2％比25.1％±6.0％,P＜0.05).结论 转染CGRP的MSCs能分泌CGRP蛋白和表达CGRP mRNA,CGRP修饰MSCs更能抑制VSMCs增殖,减轻血管损伤后新生内膜面积.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙仙萍	遵义医学院附属医院心内科	53	176	7.0	9.0
2	赵然尊	遵义医学院附属医院心内科	93	297	9.0	10.0
3	石蓓	遵义医学院附属医院心内科	183	503	10.0	12.0
4	邓文文	遵义医学院附属医院心内科	13	25	3.0	3.0
5	陈攀科	遵义医学院附属医院心内科	18	52	4.0	6.0