茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析

• 作者: 刘亚军 夏涛 姚胜波 李明卓 王云生 王文钊 许玉娇 高丽萍
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 肉桂酸4-羟基化酶 启动子 表达分析 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 35-44
• 页数: 10页
• 分类号: S571.1|Q946.5
• 字数: 5274字
• 语种: 中文

摘要

肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶，能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE 技术，克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列，其中开放阅读框长1518 bp，编码505个氨基酸，推测蛋白分子量为58.15 kD，理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1840 bp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外，还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体pYES-DEST52上，并在酿酒酵母 WAT11中进行真核表达。利用 LC-MS方法检测酶反应产物，结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。