利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白

• 作者: Joy Fleming 周盈 喻子牛 张先恩 张泓泰 毕利军 范尚华
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 关键词: 耻垢分枝杆菌 碱基切除修复 MutM 串联亲和纯化
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 935-946
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16476/j.pibb.2015.0065

摘要

MutM(formamidopyrimidine-DNA glycosylase,Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶,不但可以识别DNA损伤,而且能切除损伤的碱基,从而参与到许多种损伤的修复过程.除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxoG)外,MutM在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚.本研究主要以耻垢分枝杆菌(M.smegmnatis)为研究对象,利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与MutM相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定,并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、RpsC、UvrA与MutM的相互作用进行了验证.实验结果表明,利用串联亲和纯化方法来发现MutM相互作用的蛋白是切实可行的.本研究为进一步深入研究MutM在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点.