苹果茎痘病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 孙建设 王娜 秦子禹 邵建柱
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果茎痘病毒 TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 新方法
• 页码范围: 1400-1408
• 分类号: S661.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0161

摘要

为建立一种检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ASPV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和TaqMan探针,以体外转录的RNA为标准品构建标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验.建立的标准曲线决定系数达0.996,扩增效率为99％;该方法特异性好,与苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果锈果类病毒(ASSVd)均无交叉反应;其最低检测限为1.31×102 copies· μL-1,灵敏度比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于1.85％.该方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,适用于田间样品中ASPV的快速定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙建设	河北农业大学园艺学院	86	1569	21.0	37.0
2	邵建柱	河北农业大学园艺学院	60	510	12.0	19.0