摘要:
目的 观察熊果酸对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠活化型肝星状细胞株(HSC-T6)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)活化及下游信号通路激活的影响.方法 取大鼠HSC-T6,分为空白对照组(不予处理)、熊果酸对照组(50 μmol/L)、PDGF组(10 μg/L)、熊果酸干预组(50 μ mol/L熊果酸+10μg/L PDGF)、二联苯碘干预组(20μmol/L二联苯碘+10 μg/L PDGF)、SB203580干预组(10 μmol/L SB203580+ 10 μg/LPDGF)、LY294002干预组(10 μmol/L LY294002+10 μg/L PDGF)、活性氧阳性对照组(5μg/mL活性氧试剂rosup).采用荧光定量-PCR法检测除活性氧阳性对照组外的其余各组细胞中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平.采用Western印迹法检测膜蛋白NOX亚基p47phox(除外活性氧阳性对照组)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K,除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt,除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(除外活性氧阳性对照组和LY294002干预组)的表达.采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测除SB203580干预组和LY294002干预组外的其余各组细胞内荧光强度.组间比较行单因素方差分析和LSD检验.结果 Ⅰ型胶原mRNA表达水平,PDGF组(3.74±0.32)高于空白对照组(1.00土0.00),熊果酸对照组(0.21±0.02)低于空白对照组,熊果酸干预组(1.02±0.12)、二联苯碘干预组(1.09±0.21)、SB203580干预组(1.18±0.27)、LY294002干预组(1.15±0.26)均低于PDGF组,差异均有统计学意义(t=15.667、-4.501、-15.553、-15.154、-14.642、-14.813,P均<0.05).p47phox蛋白表达水平,PDGF组(1.98±0.53)高于空白对照组(1.00±0.00),熊果酸对照组(0.48±0.10)低于空白对照组,熊果酸干预组(0.95±0.26)、二联苯碘干预组(0.99±0.28)、SB203580干预组(0.93±0.31)、LY294002干预组(1.07±0.19)均低于PDGF组,差异均有统计学意义(t=4.209、-2.234、-4.424、-4.252、-4.510、-3.909,P均<0.05).PI3K蛋白表达水平,PDGF组(2.27±0.46)高于空白对照组(1.00±0.00),熊果酸干预组(0.59±0.28)低于PDGF组和空白对照组,熊果酸对照组(0.14±0.07)低于空白对照组,二联苯碘干预组(0.53±0.25)、LY294002干预组(0.35±0.14)均低于PDGF组,差异均有统计学意义(t=6.205、-8.208、-2.003、-4.202、-8.502、-9.831,P均<0.05).p-Akt蛋白表达水平,PDGF组(2.54±0.49)高于空白对照组(1.00±0.00),熊果酸干预组(0.74±0.20)、二联苯碘干预组(0.94±0.37)、LY294002干预组(1.17±0.41)均低于PDGF组,熊果酸对照组(0.59±0.15)低于空白对照组,差异均有统计学意义(t=5.927、-6.928、6.158、-5.273、-1.578,P均<0.05).磷酸化p38MAPK蛋白表达水平,PDGF组(1.98±0.35)高于空白对照组(1.00±0.00),熊果酸干预组(0.68±0.28)、二联苯碘干预组(0.63±0.27)、SB203580干预组(0.67±0.29)均低于PDGF组,熊果酸对照组(0.28±0.13)低于空白对照组,差异均有统计学意义(t=4.897、-6.479、-6.727、-6.529、-3.561,P均<0.05).活性氧水平,PDGF组(105.57±7.51)高于空白对照组(69.60±8.63),熊果酸干预组(64.56±9.11)、二联苯碘干预组(65.75±6.62)均低于PDGF组,熊果酸对照组(29.84±3.19)低于空白对照组,差异均有统计学意义(t=6.368、-7.288、-7.071、-7.255,P均<0.05).结论 熊果酸或可抑制PDGF诱导的大鼠HSC-T6细胞内NOX亚基p47phox蛋白膜移位及活性氧的产生,进而阻断PI3K-蛋白激酶B、p38MAPK信号通路的磷酸化及Ⅰ型胶原mRNA的表达.