人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤的大鼠肺微血管内皮细胞增殖及分泌炎症因子的影响

• 作者: 刘亮 吕璐 朱富军 梁静 王磊 童亚林 莫永亮 詹球 辛海明 阳齐琼 陈云鹏 龚震宇
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 关键词: 人羊膜匀浆上清液 大鼠 肺微血管内皮细胞 脂多糖 细胞增殖 肺损伤,急性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-16
• 页数: 7页
• 字数: 4586字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2015.01.004

摘要

目的：：探讨人羊膜匀浆上清液(hAHS)对脂多糖(LPS)致伤的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)增殖及其分泌促炎因子的影响。方法：用新鲜人羊膜制备 hAHS,用考马斯亮蓝法和 ELISA 法分别测定 hAHS中总蛋白和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-4(IL-4)、IL-10、血管生成素-1(Ang-1)、人β-防御素2(HBD2)的含量。MTT 法检测不同体积分数 hAHS(0、10%、15%、20%、25%)作用于 RPMVECs后细胞增殖活性的变化,确定 hAHS 促进 RPMVECs 增殖的最佳浓度。根据共培养条件不同,将 RPMVECs随机分为4组：N组(10%FBS+DMEM/F12),A组(10%FBS+DMEM/F12+15%hAHS),B组(10%FBS+DMEM/F12+LPS)和 C组(10%FBS+DMEM/F12+15%hAHS+LPS)。各组细胞在干预后0、12、24、48、72 h用 MTT法测定吸光度值(A值),并分别于培养6、8、10、12、24 h时用 ELISA法测定RPMVECs培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果：hAHS中总蛋白浓度为(725.125±12.625)mg/L,其中 EGF、bFGF、VEGF、IL-4、IL-10、Ang-1、HBD2的浓度分别为(504.785±4.665)、(4.426±0.138)、(0.185±0.006)、(25.650±4.104)、(13.733±2.197)、(15.561±0.496)和(4.763±0.714)ng/L。hAHS 的体积分数在10%~20%时均具有促进 RPMVECs增殖的作用且以15%hAHS培养后第7、9天的增殖率最佳,而25%hAHS在第7、9、11天使 RPMVECs增殖率小于0%hAHS组(P<0.05)。A组48和72 h细胞增殖活性较 N组显著增加,B组24、48和72 h的增殖活性较 N 组显著降低；C组24、48和72h的增殖活性较 B组显著升高(P<0.05)。ELISA结果显示,B组各时间点的IL-6和TNF-α的含量以及8、10、12和24 h的IL-8含量均显著高于N组(P<0.05)；C组10和12 h的IL-6含量,8、10、12和24 h的IL-8含量及各时间点的TNF-α含量均显著低于B组(P<0.05)。结论：hAHS含有促进组织修复、调节免疫反应、降低血管通透性及杀伤致病微生物的多种生长因子、细胞因子,对 LPS致伤的 RPMVECs增殖具有促进作用,并减少致伤后炎症因子分泌。