小菜蛾蛋白质提取方法的比较

• 作者: 冯夏 尹飞 林庆胜 沈斌斌 王筱翔 胡珍娣 陈小帆 陈焕瑜
• 来源期刊: 环境昆虫学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小菜蛾 蛋白质 提取 蛋白质组学 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 56-60
• 分类号: Q966|S436.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0858.2015.01.9

摘要

建立适用于小菜蛾蛋白质组学研究的样品前处理方法.应用SDS-PAGE电泳比较分析了TCA-丙酮沉淀,Tris-饱和酚抽提,RIPA Lysis Buffer和Ⅰ-PER Reagent直接裂解4种方法对小菜蛾幼虫总蛋白的抽提质量.结果显示:4种方法对小菜蛾全蛋白的提取率差异比较显著,其中RIPA Lysis Buffer和Ⅰ-PER Reagent两种直接裂解法蛋白提取率最高,分别为52.06 mg/g和46.16 mg/g; TCA-丙酮沉淀法提取率适中,为34.58 mg/g; Tris-饱和酚抽提法提取率最低,为27.39 mg/g.SDS-PAGE电泳分析表明,Tris-饱和酚抽提法蛋白谱条带分辨率最高,蛋白条带最多,为32条,在17.0 kDa-245 kDa的范围内分布均匀;TCA-丙酮沉淀法蛋白谱带数目为30条,条带清晰,分辨率较高,但缺失部分蛋白;RIPA Lysis Buffer和Ⅰ-PER Reagent两种直接裂解法蛋白谱条带数目较少,小分子蛋白条带丢失或不明显.根据蛋白提取率和条带的数量综合分析,TCA-丙酮沉淀法适用于小菜蛾蛋白质组学的样品前处理.