匍枝根霉cbh2基因的克隆表达与结构分析

• 作者: 孙全霞 张庆庆 李松 汤斌 谢志皓
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 匍枝根霉 纤维二糖水解酶 克隆表达 纯化 结构分析
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 22-27
• 页数: 6页
• 字数: 4190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201504005

摘要

采用反向PCR技术从匍枝根霉中克隆cbh2基因,该基因编码440个氨基酸的蛋白质.利用DS2.5软件进行同源模拟和建立分子动力学模型,研究cbh2催化纤维六糖水解过程中结合区(CBM)上的关键位点,催化区(CD)上催化隧道关键位点的相互依赖作用,水解β-1,4糖苷键,生成纤维二糖.把cbh2基因与pET22-b(+)载体连接,实现了在E.coli BL21(DE3)中原核表达.通过镍柱层析、DEAE FF层析和G-75层析三步纯化法获得46 kDa的酶蛋白,比活力为4.67 IU/mg.纯化的重组酶具有高水平的催化活性,对微晶纤维素具有较好的水解特性,CBHII酶的Km为7.358 (mg/mL).研究CBHII酶的基本特性,其最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0,CBHII酶在pH 4～7下具有较宽的稳定性,在65℃以下热稳定性较好,在催化过程中保持较高的活力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤斌	安徽工程大学生物与化学工程学院	104	726	16.0	22.0
2	张庆庆	安徽工程大学生物与化学工程学院	59	421	12.0	17.0
3	孙全霞	安徽工程大学生物与化学工程学院	2	0	0.0	0.0
4	李松	安徽工程大学生物与化学工程学院	27	36	4.0	5.0
5	谢志皓	安徽工程大学生物与化学工程学院	4	6	1.0	2.0