假眼小绿叶蝉中肠受体结合短肽的融合表达及其与叶蝉中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)互作

• 作者: 关雄 刘昭霞 吴松青 姚祖杰 张灵玲 朱棚丽 林秋秋 黄志鹏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 茶假眼小绿叶蝉 刷状缘膜囊泡(BBMV) 克隆 表达 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1494-1500
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.11.013

摘要

茶假眼小绿叶蝉(Empoasca vitis Gothe)是危害我国经济作物茶叶(Camellia sinensis)的优势种,其发生最广、危害最重.为寻找利用生物农药解决虫害问题,提高茶叶产量质量,同时初步探索苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt) Crystal (Cry)毒素与叶蝉中肠的互作机制,本研究以前期噬菌体文库筛选得到的能与靶标昆虫中肠Cry潜在受体结合的短肽序列设计引物,通过PCR扩增大小为750 bp的短肽序列,与pMD-18T克隆载体连接,构建重组表达载体pT-egfp-32a并进行诱导表达,采用His-tag亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,最后通过免疫印迹实验验证表达的短肽与叶蝉中肠刷状缘膜囊泡(brash border membrane vesicle,BBMV)的结合活性.本研究成功克隆了短肽序列,并诱导纯化目的蛋白,成功获得具有结合活性的短肽片段,为活性片段定向改造Cry domain获得对叶蝉有毒性作用的新型毒素提供了工作基础,为进一步了解毒素与受体间互作关系提供依据.