达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究

• 作者: 单喜双 叶欢 岳华梅 李创举 杨晓鸽 陈细华
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 达氏鲟 生长激素 qRT-PCR Western-blot 荧光免疫组化
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 307-314
• 页数: 8页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 5802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2015.41

摘要

为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone, GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART cDNA,克隆得到GH全长cDNA序列。达氏鲟GH全长cDNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region, UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame, ORF)和311 bp的3′UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现,达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明,达氏鲟GH mRNA主要在垂体和下丘脑中表达,且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍； Western-blot研究结果与qRT-PCR一致,仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白,且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示, GH主要定位于垂体中部,下丘脑中也有少量荧光信号；苏木精-伊红组织切片染色研究表明, GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。