西花蓟马化学感受蛋白的cDNA克隆、时空表达分析及组织定位

• 作者: 吴圣勇 张治科 雷仲仁
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 西花蓟马 化学感受蛋白 分子克隆 原核表达 表达谱 免疫定位
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1-14
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.01.001

摘要

[目的]研究西花蓟马Frankliniella occidentalis化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)在其嗅觉及化学感受系统中的作用.[方法]利用RT-PCR和RACE技术克隆西花蓟马化学感受蛋白基因,用DNAMAN软件进行序列分析,使用BLAST进行同源性比较,采用MEGA6的Neighbor-joining法构建了进化树.通过实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测了西花蓟马不同发育期以及成虫不同组织(触角、头、足、胸、腹)中该基因的表达谱.免疫新西兰大白兔制备了FoccCSP1蛋白抗体,与样品切片中FoccCSP1蛋白以及10 nm胶体金颗粒偶联的羊抗兔二抗反应,经透射电镜观察,对该蛋白在西花蓟马成虫组织中进行免疫定位.[结果]克隆并鉴定了一个西花蓟马化学感受蛋白基因,命名为FoccCSP1(GenBank登录号:KM527949).该基因cDNA序列全长597 bp,完整开放阅读框(ORF)288 bp,编码95个氨基酸,成熟蛋白分子量11.377 kD,等电点4.72,具有化学感受蛋白典型的4个保守半胱氨酸位点特征.FoccCSP1与东亚飞蝗Locusta migratoria LmigCSP(GenBank登录号:CAJ01476.1)的氨基酸序列一致性最高,进化关系最近.FoccCSP1在西花蓟马不同发育阶段和成虫不同组织中均有表达,在羽化1d的雌虫中相对表达量最高,其次是2龄若虫,蛹和成虫后期表达量最低;在触角和足中相对表达量较高.成功构建了重组表达质粒pET-30a/ FoccCSP1,并诱导表达,经Ni柱纯化,获得目的蛋白;免疫定位表明,该蛋白在西花蓟马触角、足、头等部位血淋巴中均大量存在.[结论]明确了西花蓟马化学感受蛋白基因FoccCSP1的核苷酸、氨基酸序列特征.FoccCSP1广泛分布在西花蓟马多个组织及各个发育期,据此推测该基因可能在西花蓟马嗅觉识别、感受机械刺激以及调节生长发育等方面扮演重要角色.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷仲仁	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	70	979	18.0	27.0
2	张治科	宁夏农林科学院植物保护研究所	37	218	9.0	12.0
4	吴圣勇	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	17	207	9.0	14.0