镉对河南华溪蟹卵黄磷蛋白在卵巢中表达含量的影响及ELISA法的建立

• 作者: 何永吉 刘冬梅 杨健 汉斯·达姆斯 王兰
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 河南华溪蟹 卵黄磷蛋白 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 酶联免疫吸附法 镉
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 287-293
• 页数: 7页
• 分类号: X174
• 字数: 5922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2015.38

摘要

为了探究镉对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)的卵子发生的影响,通过凝胶过滤层析法纯化了成熟卵巢中的卵黄磷蛋白(Vitellin, Vn),采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定了Vn亚基数量及分子量,以纯化的Vn为抗原制备了Vn多克隆抗血清并建立了可靠的Vn含量测定的ELISA方法。采用氯化镉体外亚慢性染毒的方法,运用Vn-ELISA方法检测镉暴露对卵巢组织中Vn含量的影响。实验设对照组和5.8 mg/L镉处理组,处理时间分别为10、15和20d。结果显示,(1) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明该蛋白由分子量为102、84和70 kD的3个亚基组成,同时Western-blotting检测表明,抗血清对该蛋白具有较强的免疫特异性；(2)在Vn-ELISA中, Vn抗体最佳稀释倍数为1︰100000,该方法的工作浓度范围为125—2000 ng/mL,定性检测的灵敏度可达到15.62 ng/mL；卵巢中Vn含量测定的结果中各批次间没有显著差异,且平均变异系数分别仅为7.81%,表示该法具有较高的稳定性和重复性；(3)镉引起卵巢组织中Vn含量的显著降低,与镉处理时间具有时间-效应关系,说明了镉暴露可影响河南华溪蟹卵母细胞的成熟并对卵子发生产生抑制作用,进而影响卵巢的正常发育。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王兰	山西大学生命科学学院	123	1118	16.0	28.0
2	刘冬梅	山西医科大学基础医学院	7	30	3.0	5.0
3	何永吉	山西大学生命科学学院	8	146	5.0	8.0
4	杨健	山西大学生命科学学院	2	9	2.0	2.0